桑黄属真菌界,担子菌门,伞菌纲,锈革孔菌目,锈革孔菌科,纤孔菌属,是一种传统的药用草菌,因通常生长在桑属植物上,子实体为黄褐色而得名。自1968年日本学者用桑黄子实体的水提取物进行细胞实验且发现其对小鼠S-180的抑制率为96.7%以来,国际上对桑黄的药用功能进行了广泛研究,发现桑黄具有抗肿瘤、免疫调节等药理作用,被认为是已知高等真菌中抗癌效果最好的珍稀药用菌类之一,已成为药用真菌研究领域的一个热点。但是由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约,自然界中桑黄子实体稀少,虽能人工栽培出桑黄子实体,但所需条件苛刻,生物学效率低,目前难以实现规模化栽培;而真菌的深层发酵技术具有无菌、生产条件可控制、在短时间内可获得大量细胞产物和代谢物、可自动化控制规模化生产等优点;因此采用液体发酵培养获得大量桑黄菌丝体或活性物质具有重要意义。本文采用单因子实验及正交试验的方法对桑黄液体发酵工艺进行实验研究,以获得具有与桑黄子实体相似功效成分的桑黄菌丝体液体发酵工艺,为桑黄菌丝体的规模化生产,解决桑黄子实体资源匾乏问题奠定理论基础。
方法
菌种活化:将保存的桑黄菌种接人PDA斜面培养基中,于25℃恒温培养7-10d,活化2-3代后备用。桑黄液体种子培养及主要指标的测定方法①桑黄液体种子培养方法:500mL三角瓶装液体种子培养基100 mL,无菌接人约1cm2新鲜桑黄斜面菌种4一5块,28℃,180r/min振荡培养5d,备用;②生物量的测定方法:采用重量法。将发酵液用2层纱布过滤,蒸馏水冲洗菌丝体3次,于恒重的称量瓶中,60℃干燥至恒重,获得桑黄菌丝体粉,计算桑黄菌丝体产率。菌丝体产率(g/100mL)=(菌丝体干重(g)/发酵液体积(mL))x100%;③含量测定方法:以芦丁为标准品,采用NaN02AI(NO3),比色法对菌丝体黄酮含量进行测定;以葡萄糖为标准品,采用苯酚一硫酸法对菌丝体多糖含量进行测定。
桑黄液体发酵培养基优化
①综合碳氮源的筛选:以基础培养基为对照,分别以2%豆粉、1%豆粉+1%玉米粉、2%数皮、%花生粉为综合碳氮源,替代基础培养基中的玉米粉,其他成分不变,接种10%的液体菌种,28℃, 180 r/min振荡培养3.5d;测定菌丝体产率;②最适碳源、氮源的筛选:以基础培养基为对照,分别添加2%的蔗糖、2%乳糖、2%可溶性淀粉替代葡萄糖,其他成分不变,接种10%的液体菌种,28℃,180r/min振荡培养3.5d;测定菌丝体产率。在碳源试验基础上,分别以1%的酵母膏、牛肉膏、硫酸钱及1%混合氮源(蛋白陈:酵母膏=1:1)代替基础培养基中的蛋白陈,同法进行最适氮源的筛选试验。③正交试验因素及水平:根据单因素试验结果,选取最适的碳源、氮源、综合碳氮源,采取正交试验的方法对发酵培养基配方进行优化,
最适装液量的确定
在500mL摇瓶中分别装人80,100,150和200mL的发酵培养基进行桑黄菌丝培养。当装液量为100mL时,菌丝体产率最高。这是由于桑黄属于好氧性真菌,装液量直接影响其发醉生产及代谢。装液量越少,培养基中溶解氧浓度越高,菌丝生长速度越快。但装液量过少,过多的氧供给会促使菌丝生长过快,造成后期营养供应不足,导致菌丝易衰老、自溶。装液量越多,通气量就少,不利于桑黄菌丝的生长。
讨论
研究表明,黄酮类及真菌多糖类化合物已作为抗氧化剂广泛应用,具有提高动物机体免疫的生理功效,桑黄作为黄酮类化合物含量较高的真菌,其利用前景十分广阔。本实验所获得的液体发酵工艺不受季节及环境的限制,在短期内获得大量的桑黄菌丝体,所获菌丝体粉含有与子实体相近的功效成分,可克服野生桑黄资源短缺、人工栽培生物学效率低、应用成本高的缺点,具有较大的推广用应价值。本文只采取了饮料配方及工艺研究中的某部分研究内容,如需得到完整的配方及工艺流程可联系太阳集团网站入口官网,作为专业的饮料研发机构,太阳集团提供果汁饮料、功能饮料、蛋白饮料等各类饮料配方研发制作、饮料生产技术指导等整体解决方案;联系电话:13518183030 13518182323
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